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產(chǎn)品介紹 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一種非 常高效的新型轉(zhuǎn)染試劑，細胞毒性更低，轉(zhuǎn)染效果更佳，達到了國際最主流轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果。適用于把質(zhì)粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸轉(zhuǎn)染 到真核細胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 對于常見的 哺乳動物細胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復性好、操作簡單、 無明顯的細胞毒性，并且對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑的 使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致， 轉(zhuǎn)染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不 僅適用于質(zhì)粒、siRNA 等單一成分的細胞轉(zhuǎn)染，也適合多個 質(zhì)?；蛘哔|(zhì)粒與 siRNA 等的組合轉(zhuǎn)染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染過表達質(zhì)粒后，通常 24-48 h 后達到較高的蛋白表達水平， 并且很多情況下蛋白表達量在轉(zhuǎn)染后 48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后 24 h；轉(zhuǎn)染 siRNA 通常 3-5 天后對于目的基因的下調(diào)水平會 比較理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染細胞時，基本不受細胞培養(yǎng)液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進行細胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果， 推薦轉(zhuǎn)染時使用不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液， 或者改變或添加培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。

使用方法

     1. DNA 轉(zhuǎn)染 下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動物細胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計算。大部分細胞系所使用的 DNA（μg）與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent（μL）的比值為 1: 2 到 1: 3， 轉(zhuǎn)染高密度細胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達水平和低細胞毒 性。優(yōu)化轉(zhuǎn)染是必需的（見優(yōu)化質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染）。 

A. 貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔 0.5-2×105個細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時細胞可長至 70-90%匯合度。

懸浮細胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔 4-8×105 個細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無血 清培基） 稀釋質(zhì)粒 DNA，輕輕混勻。 

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 適 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 注意：請在 25 min 內(nèi)進行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)濁）。

     注意：轉(zhuǎn)染復合物常溫下可在 6 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。

C. 在每孔細胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。 

D. 37℃培養(yǎng) 18-48 h 后檢測基因表達，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換 培養(yǎng)基。 對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 24 h 后以 1: 10 稀釋接種于新鮮培養(yǎng)基中，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

優(yōu)化 DNA 轉(zhuǎn)染 

     可通過改變細胞密度、質(zhì)粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 濃度以優(yōu)化轉(zhuǎn)染。要保證細胞融合 在 90% 以 上 ， DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之間進行調(diào)整。

2. RNAi 或 siRNA 轉(zhuǎn)染 

     下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動物細胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按 每孔計算。

A. 轉(zhuǎn)染前一日，將細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基 中，使其在轉(zhuǎn)染時長至 30-50%匯合度。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無血 清基）稀釋 20 pmol siRNA（轉(zhuǎn)染時 siRNA 終濃度為 33 nM）， 輕輕混勻。

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 

     注意：請在 25 min 內(nèi)進行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)渾濁）。

C. 在每孔細胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。37℃培養(yǎng) 24-96 h 后檢測基因表達，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換培養(yǎng)基。 

siRNA 轉(zhuǎn)染優(yōu)化

     可 調(diào) 整 siRNA 與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以優(yōu)化轉(zhuǎn)染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50pmol 之間調(diào)整，LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之間調(diào)整，在增加細胞密度時也應優(yōu)化轉(zhuǎn)染 劑量。

轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整 

不同培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)染液、細胞和培養(yǎng)基的用量按照培養(yǎng) 材料面積換算。在 96 孔板細胞高通量自動分析系統(tǒng)，推薦 每孔使用 50 μL 轉(zhuǎn)染液。

注意：在 96 孔板，可將細胞直接接種于轉(zhuǎn)染液中以實 現(xiàn)快速轉(zhuǎn)染，直接在培養(yǎng)板中配制轉(zhuǎn)染液 100μL，直接將細胞加入培養(yǎng)板中，其密度為上述方法的 2 倍，細胞在轉(zhuǎn)染液中可正常貼壁。

注意事項

1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。 

2. 轉(zhuǎn)染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)。 

3. 需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng) 液或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑使用 后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露在空氣中，影響轉(zhuǎn)染效 率。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。